Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管
为在血液采集、储存和运输过程中保存游离DNA而设计
应用范围：仅限科研使用，不能用于临床。
Apostle MiniMaxTM游离DNA采血管（BCT）采用Apostle MiniMaxTM专利技术，能有效防止游离DNA在血液采集、储存和运输过程中的降解和污染。Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管使用专利技术，可以实现：
- 在血液储存和运输过程中，防止血液中细胞内核酸物质释放到血浆中,造成污染。
- 防止血液中的游离DNA降解。
- 防止血液中的游离DNA和其他生物物质（如蛋白质）交联。
使用常规的EDTA采血管存储血液，会导致大量细胞内的基因物质释放到血液中（图1），从而显著的降低游离DNA分析的灵敏度和准确性。因此，防止细胞内基因物质对游离DNA的污染是保存血液中游离DNA的一个关键点。
图1. 使用EDTA管长期储存血液，会导致细胞裂解，从而使细胞内的基因物质释放到血液中造成污染。
与收集后立即处理的血液样品（蓝线）相比，7天后在K 3EDTA试管中可以观察到大量的细胞基因物质的污染（红线）。因此，K3EDTA采血管不适用于保存血液中的cfDNA。Apostle MiniMaxTM游离DNA采血管（BCT）能够防止血液中细胞内核酸物质释放到血浆中，避免了对游离DNA的污染。数据显示，Apostle MiniMaxTM游离DNA采血管（BCT）可以在室温保存（图2A）或运输(图2B)全血7天，无明显细胞破裂。市面上的其他产品，虽然也能达到类似的效果，但其化学特性会导致游离DNA与其他生物物质（如蛋白质）交联，将会影响之后的游离DNA提纯。如图2所示，Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管（红色）在7天保存或运输之后，与收集后立即处理的样品相比（蓝色），没有峰位的偏移，游离DNA的主峰始终在170bp左右，而其他竞品（绿色）则有大幅度偏移至200bp。
图2. Apostle MiniMaxTM游离DNA采血管可以有效防止血液中的细胞内核酸物质释放到血液中而造成的对游离DNA的污染。
将血液分别保存在EDTA采血管、Apostle MiniMaxTM游离DNA采血管、和竞品游离DNA采血管中。做为参照（第0天参照）立即将EDTA采血管中的血液进行处理。 对于Apostle MiniMaxTM游离DNA采血管和竞品游离DNA采血管，分别进行（A）储存7天（B)运输7天。7天后，对这些采血管进行处理。(A) 与第0天参考（蓝线）相比，使用Apostle MiniMaxTM游离DNA采血管，可以收集大于90%的游离DNA（红线）；使用竞品游离DNA采血管（绿线），分离的游离DNA产生了从170bp到200bp的峰位移动。如图所示，Apostle MiniMaxTM游离DNA采血管显示出最小的细胞内基因DNA污染。
(B) 同样实验设计，在7天移动的实验中，我们观察到相同的现象：Apostle MiniMaxTM游离DNA采血管显示出最小的细胞内基因DNA污染。如图，第0天参考（蓝色）；Apostle MiniMaxTM游离DNA采血管（红色）；竞品游离DNA采血管（绿色）。
在游离DNA的提取过程中，大多数产品表明对于保存在EDTA采血管中的样品，无需进行Proteinase K的处理。但对于保存在竞品中的样品，长待30分钟到一小时的Proteinase K处理是不可省略的，否则会导致游离DNA的提取失败。这进一步证明了在该竞品中的化学物质会使蛋白质或其他生物物质与游离DNA的交联。从图3A可见，如果提取过程中省略Proteinase K的裂解，保存在竞品中7天的样品无游离DNA的提取；而Proteinase K的裂解处理对于保存在Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管的样品则没有影响（图3B）。
图3.Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管可以有效防止在血液存储过程中的游离DNA与血液中蛋白等物质的交联。
(A) 使用竞品Streck cfDNA采血管储存血液7天，然后从血液中分离cfDNA。我们对proteinase K步骤进行了对比试验。使用Proteinase K进行裂解是竞品Streck cfDNA采血管的必要步骤。进一步说明cfDNA和血液中的蛋白等产生交联。
(B) 使用Apostle MiniMaxTM游离DNA采血管储存血液7天，然后从血液中分离游离DNA。我们对proteinase K步骤进行了对比试验。使用Proteinase K进行裂解不是Apostle MiniMaxTM游离DNA采血管的必要步骤。如图所示，使不使用Proteinase K裂解（不使用Proteinase K，蓝线；使用Proteinase K，红线），游离DNA的峰位并没有明显变化，并都在170bp（正常游离DNA峰位）。
通过对保存在不同采血管中的样品进行qPCR分析，我们用内参beta-globin来反映游离DNA的含量。从图3B、图4可见，7天的保存过程中，EDTA管中的细胞大量释放细胞的DNA，导致beta-globin含量的显著上升。而保存在Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管中的样品，不管是静置室温保存，室温运输，或者不采用Proteinse K裂解，与采血后立即处理的样品相比，beta-globin的CT值和扩增曲线没有明显差异，表明游离DNA在Apostle MiniMax TM 游离DNA采血管中可以稳定保存。
图4. Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管可以高质量高效率的保存血液中的外源性游离DNA。
将来自同一个体的新鲜血液样品储存在EDTA采血管和Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管中，在室温下保存7天。且在第0天是，立即处理一根EDTA采血管中储存的样本作为参照（第0天参考）。我们通过qPCR来定量分析游离DNA中的beta-globin的表达。如图，qPCR扩增曲线和CT值显示Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管在不同情况下（裂解，裂解并运输，不裂解三种情况）和第0天参照数值高度吻合。使用EDTA采血管7天后的beta-globin数据和第0天参照相比有明显下降。为了进一步验证Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管保存游离DNA的高稳定性和高回收率，我们将含有EGFR c.2573T>G L858R突变（合成产品，长度约170bp）的DNA片段加入到使用Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管存储的新鲜血液中，保存7天后回收。qPCR定量实验证明该基因突变的表达量经过7天的存储后没有明显变化（图5）。PCR的CT数值显示99%以上的突变DNA片段可以有效回收，这表明Apostle MiniMax TM 游离DNA采血管保存游离DNA的高稳定性。
图5. Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管可以高质量高效率的保存血液中的外源性游离DNA。
将来自同一个体的新鲜血液样品储存在多个Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管中，并加入100uL含有浓度为0.01ng / uL的EGFR c.2573T>G L858R突变（合成产品，长度约为170bp）的DNA片段。立即处理其中一根采血管作为参照（第0天参考）。并将另一根采血管在室温下储存7天，然后用Apostle MiniMaxTM 游离DNA分离试剂盒分离出游离DNA（第7天），并通过qPCR定量分析分离出游离DNA中的EGFR c.2573T>G L858R突变表达量。如图所示，PCR 扩增曲线和CT值在第7天的第0天保持高度一致。综上所述，Apostle MiniMaxTM 游离DNA采血管可以有效的保存血液中的游离DNA，既可以防止由于细胞破裂释放核酸物质对游离DNA造成的污染，又可以有效防止血液中的游离DNA降解，还可以防止游离DNA与血液中其他蛋白等物质进行交联。
应用范围：仅限科研使用，不能用于临床。
